Plasmide CRISPR d'Activation (h) NDUFS1: sc-416401-ACT

NDUFS1 code une sous-unité centrale du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale (NADH:ubiquinone oxydoréductase), qui contribue au transfert d’électrons du NADH vers l’ubiquinone et soutient le pompage des protons à travers la membrane interne mitochondriale. Par son rôle dans la phosphorylation oxydative, NDUFS1 influence le potentiel de membrane mitochondrial, la production d’ATP et l’homéostasie redox cellulaire, le reliant ainsi à l’adaptation métabolique et à la gestion des espèces réactives de l’oxygène. Une altération de la fonction du complexe I est associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale et a été étudiée dans le contexte de troubles neuromusculaires et neurodégénératifs, ainsi que des réponses au stress métabolique. NDUFS1 constitue donc une cible utile pour étudier comment l’intégrité de la chaîne de transport des électrons façonne la bioénergétique, la signalisation mitochondriale et l’activation des voies de réponse au stress.

NDUFS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NDUFS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NDUFS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NDUFS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NDUFS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NDUFS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NDUFS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NDUFS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NDUFS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NDUFS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.