Plasmide Double Nickase (h) NDUFB5: sc-410902-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NDUFB5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NDUFB5 Double Nickase (h) et le plasmide NDUFB5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NDUFB5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NDUFB5 Antibody (F-2): sc-514245
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NDUFB5 | sc-410902-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NDUFB5 | sc-410902-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NDUFB5 code une sous-unité accessoire du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale (NADH:ubiquinone oxydoréductase) qui contribue au bon assemblage du complexe et au transfert d’électrons du NADH vers l’ubiquinone. Par son rôle dans la phosphorylation oxydative, NDUFB5 influence le maintien du potentiel de membrane mitochondriale, la production d’ATP et l’équilibre rédox cellulaire, avec des effets en aval sur l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. Une altération de la fonction du complexe I est associée à un stress bioénergétique mitochondrial, à une reprogrammation métabolique et à des vulnérabilités dans les tissus à forte demande énergétique, ce qui fait de NDUFB5 un point d’intérêt pertinent pour l’étude des dysfonctions mitochondriales. Les travaux sur NDUFB5 recoupent souvent des voies impliquées dans la protéostasie mitochondriale, la mitophagie et les réponses de signalisation noyau–mitochondrie à une respiration altérée.
NDUFB5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NDUFB5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NDUFB5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NDUFB5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NDUFB5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.