Plasmide CRISPR d'Activation (m) NDUFB5: sc-425783-ACT

Le gène murin **Ndufb5** code **NDUFB5**, une sous-unité accessoire du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale (NADH:ubiquinone oxydoréductase) qui soutient la phosphorylation oxydative et la production d’ATP cellulaire. En tant que composant du système de transport d’électrons de la membrane interne mitochondriale, NDUFB5 contribue au transfert d’électrons dérivés du NADH, au maintien du potentiel de membrane mitochondriale et à la régulation de l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. Une altération de la fonction du complexe I est largement associée aux réponses au stress métabolique et aux voies de dysfonctionnement mitochondrial, qui recoupent la neurodégénérescence, des phénotypes cardiométaboliques et la signalisation inflammatoire. **Ndufb5** est donc pertinent pour étudier comment la bioénergétique mitochondriale remodèle l’état cellulaire au cours du développement et dans des modèles murins de maladie.

NDUFB5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ndufb5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NDUFB5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ndufb5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ndufb5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NDUFB5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ndufb5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NDUFB5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NDUFB5 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ndufb5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.