Plasmide CRISPR d'Activation (h) NDUFB5: sc-410902-ACT

Le gène humain **NDUFB5** code une petite sous-unité accessoire du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale (NADH:ubiquinone oxydoréductase), qui soutient l’assemblage correct du complexe et le transfert d’électrons au sein de la phosphorylation oxydative. En contribuant au pompage des protons et au maintien du potentiel de membrane mitochondrial, NDUFB5 influence la production d’ATP et l’homéostasie rédox, des processus étroitement liés à la signalisation par les ROS et à l’adaptation métabolique. Une altération de la fonction du complexe I est largement pertinente pour la biologie des maladies mitochondriales et a été observée dans des contextes de dysfonction neuromusculaire, de neurodégénérescence et de métabolisme tumoral, où le stress bioénergétique et le remodelage mitochondrial sont marqués. Ainsi, NDUFB5 constitue une cible utile pour étudier l’intégrité de la chaîne respiratoire, la communication mito-nucléaire et les voies qui couplent le métabolisme énergétique aux décisions de destinée cellulaire.

NDUFB5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NDUFB5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NDUFB5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NDUFB5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NDUFB5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NDUFB5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NDUFB5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NDUFB5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NDUFB5 dans les cellules tumorales présentant une expression de NDUFB5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.