NDST1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404078

Descripción general

NDST1 (N-desacetilasa/N-sulfotransferasa 1) es una enzima clave residente en el aparato de Golgi que inicia y propaga la N-sulfatación durante la biosíntesis de proteoglucanos de heparán sulfato, dando forma a los patrones de sulfatación que determinan la especificidad de unión de ligandos. Al controlar la estructura del heparán sulfato, NDST1 modula la organización de la matriz extracelular y la función de correceptor en la superficie celular, lo que influye en vías de señalización de factores de crecimiento y morfógenos, incluidas las de FGF, WNT, Hedgehog y VEGF. Estas interacciones dependientes de la sulfatación afectan programas de adhesión, migración y diferenciación celular que son centrales para el desarrollo y la homeostasis tisular. La actividad desregulada de NDST1 y la composición alterada del heparán sulfato se han asociado con una fisiopatología diversa, incluida la remodelación del microambiente tumoral, la señalización relacionada con la fibrosis y fenotipos del neurodesarrollo, lo que convierte a NDST1 en una diana útil para estudios mecanísticos de señalización impulsada por el glicocálix.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NDST1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NDST1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NDST1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NDST1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NDST1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NDST1 para la investigación de la señalización de NDST1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NDST1 críticos para la función de NDST1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NDST1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NDST1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NDST1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NDST1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NDST1 (h) y el plásmido HDR NDST1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NDST1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NDST1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.