Plasmide CRISPR/Cas9 KO NDR1 (h): sc-402716

Présentation

STK38 code la sérine/thréonine kinase NDR1, une kinase de la famille AGC qui agit en aval de MST1/2 dans des voies de signalisation apparentées à Hippo afin de réguler la progression du cycle cellulaire, la biologie du centrosome, l’apoptose et l’organisation du cytosquelette. L’activité de NDR1 est contrôlée par phosphorylation et par liaison à des cofacteurs (notamment les protéines MOB), ce qui relie des signaux amont de stress et de polarité à des sorties transcriptionnelles et structurelles. Du fait de ses rôles dans le contrôle de la mitose, les réponses associées aux dommages de l’ADN et l’homéostasie épithéliale, STK38/NDR1 a été étudiée dans des contextes pertinents pour la biologie tumorale, la neurobiologie et la signalisation liée à l’inflammation. La perturbation des voies dépendantes de NDR1 peut influencer des phénotypes de prolifération, de survie et de migration, fréquemment examinés dans des modèles mécanistiques de maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NDR1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STK38 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STK38, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STK38 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NDR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STK38 pour l'étude de la signalisation de NDR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STK38 essentiels à la fonction de NDR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STK38 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NDR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NDR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STK38. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NDR1 plasmide HDR (h) et le NDR1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STK38 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STK38 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.