Plasmide CRISPR d'Activation (h) NDH II: sc-402757-ACT

DHX9 humain code l’hélicase à boîte DExH NDH II, une hélicase ARN/ADN multifonctionnelle qui régule la transcription, la maturation des pré-ARNm, l’export des ARNm, la traduction et le maintien de la stabilité du génome. NDH II participe au métabolisme des R-loops et résout des acides nucléiques structurés, ce qui la relie à la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN et aux voies du stress réplicatif. Par ses interactions avec des complexes ribonucléoprotéiques et des acides nucléiques associés aux promoteurs, DHX9 peut influencer des programmes d’expression génique de l’immunité innée et de réponse au stress. Une activité ou une expression altérée de DHX9 a été associée à une dérégulation du processing de l’ARN et à une instabilité liée à la chromatine observées dans de multiples contextes cellulaires pertinents pour les maladies, ce qui étaye son utilisation comme cible mécanistique en génomique fonctionnelle.

NDH II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DHX9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NDH II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DHX9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DHX9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NDH II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DHX9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NDH II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NDH II dans les cellules tumorales présentant une expression de DHX9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.