Ndfip2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405125-ACT

NDFIP2（Ndfip2）は、エンドソーム膜に局在するアダプタータンパク質をコードしており、NEDD4ファミリーのHECT型E3ユビキチンリガーゼに結合してその活性化を促し、ユビキチン化されたカーゴがエンドサイトーシスを経てリソソーム関連の分解・代謝回転へと導かれるのを助けます。これらの相互作用を通じて、Ndfip2は、膜タンパク質量のユビキチン依存的な制御、小胞輸送、および細胞ストレス応答に結び付いたシグナル出力の調節に寄与します。NDFIP2の発現は、受容体やトランスポーターの動態をユビキチン介在で制御することが炎症、細胞生存、分化プログラムに影響し得る免疫系および上皮系の文脈で研究されてきました。エンドリソソーム輸送とユビキチンリガーゼネットワークの破綻は、がん生物学や神経免疫メカニズム全般に広く関わるため、NDFIP2は経路に焦点を当てた研究における有用な結節点（ノード）となります。

Ndfip2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NDFIP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ndfip2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NDFIP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNDFIP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ndfip2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNDFIP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNdfip2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNDFIP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNdfip2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。