Plasmide CRISPR/Cas9 KO NCS-1 (h): sc-404303

Présentation

NCS1 code pour le capteur neuronal du calcium-1 (neuronal calcium sensor-1, NCS-1), une protéine conservée liant le Ca²⁺ via des motifs EF-hand, qui convertit les transitoires de calcium intracellulaire en signaux effecteurs au niveau des membranes et des synapses. NCS-1 régule des processus tels que le trafic vésiculaire et l’exocytose, la croissance des neurites, ainsi que la modulation de la fonction des récepteurs et des canaux ioniques, via des interactions avec des cibles comme les phosphatidylinositol 4-kinases et des complexes de signalisation qui façonnent des voies dépendantes des phosphoinositides. Dans les cellules humaines, NCS-1 contribue au contrôle, dépendant du calcium, de l’excitabilité neuronale et de la plasticité synaptique, en reliant les flux de Ca²⁺ induits par un stimulus à des réponses adaptatives en aval. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de NCS-1 ont été étudiées dans le contexte de phénotypes neuropsychiatriques et neurodégénératifs, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques de la dérégulation de la signalisation calcique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NCS-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NCS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NCS1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NCS1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NCS-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NCS1 pour l'étude de la signalisation de NCS-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NCS1 essentiels à la fonction de NCS-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NCS1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NCS-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NCS-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NCS1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NCS-1 plasmide HDR (h) et le NCS-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NCS1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NCS1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.