Plasmide CRISPR d'Activation (h) NCAM2: sc-404803-ACT

NCAM2 (neural cell adhesion molecule 2) code une protéine d’adhérence de la superfamille des immunoglobulines, associée à la membrane et enrichie dans le système nerveux, qui favorise la croissance des neurites, le guidage axonal et l’assemblage des synapses. Grâce à des interactions homophiliques et hétérophiliques à la surface cellulaire, NCAM2 contribue à la reconnaissance cellule–cellule et à la stabilisation des contacts neuronaux, en influençant le remodelage du cytosquelette et la connectivité dépendante de l’activité. Des altérations de l’expression ou de la régulation de NCAM2 ont été impliquées dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, en accord avec son rôle dans la structuration des réseaux synaptiques et la formation des circuits neuronaux. En tant que marqueur et modulateur de la différenciation et de la plasticité neuronales, NCAM2 est largement pertinente pour les études portant sur la signalisation dépendante de l’adhérence et l’organisation synaptique.

NCAM2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NCAM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NCAM2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NCAM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NCAM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NCAM2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NCAM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NCAM2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NCAM2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NCAM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.