Plasmide Double Nickase (h) NCAM/CD56: sc-400302-NIC

NCAM1 code pour la molécule d'adhérence cellulaire neurale NCAM/CD56, une glycoprotéine de la superfamille des immunoglobulines qui médie des interactions cellule–cellule et cellule–matrice indépendantes du Ca²⁺. Par des liaisons homophiles et hétérophiles, NCAM/CD56 régule la croissance des neurites, le guidage axonal, la plasticité synaptique et la migration, et peut transmettre des signaux via les voies Fyn/FAK, MAPK/ERK et le remodelage du cytosquelette. L'épissage alternatif et la polysialylation modulent la force d'adhérence et la motilité cellulaire dynamique au cours du développement et de la réparation tissulaire. Une expression ou des modifications dérégulées de NCAM1 sont associées à des altérations des processus neurodéveloppementaux et servent également de marqueur fonctionnel en biologie des cellules NK, ainsi que dans les études de l'invasion des cellules tumorales et des interactions immunitaires.

NCAM/CD56 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NCAM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NCAM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NCAM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NCAM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.