Plasmide CRISPR d'Activation (h) NAT-8: sc-411236-ACT

Le gène humain **NAT8** code **NAT-8**, une **N‑acétyltransférase** enrichie dans le rein et le foie, principalement localisée aux membranes du réticulum endoplasmique, qui catalyse des réactions de **N‑acétylation** influençant la prise en charge des petites molécules et des xénobiotiques. L’activité de NAT-8 est liée à l’homéostasie métabolique et aux processus de détoxification cellulaire, en interaction avec des voies qui modulent les réponses au stress oxydant et la fonction de l’épithélium tubulaire. Des variations génétiques et une expression altérée de **NAT8** ont été associées à des traits rénaux et à une susceptibilité aux lésions rénales, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de néphrotoxicité et de stress métabolique. Dans des modèles cellulaires, l’expression de NAT-8 peut moduler des phénotypes liés au transport épithélial, à la résistance cellulaire à l’exposition à des substances chimiques et à des programmes transcriptionnels associés aux lésions.

NAT-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NAT8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NAT-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NAT8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NAT8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NAT-8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NAT8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NAT-8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NAT-8 dans les cellules tumorales présentant une expression de NAT8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.