Na⁺ CP type IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422820

Übersicht

Scn3a kodiert den spannungsabhängigen Natriumkanal Na+ CP Typ IIIα der Maus, eine porenbildende α‑Untereinheit, die schnelle einwärtsgerichtete Na+-Ströme vermittelt, welche der Auslösung und Weiterleitung von Aktionspotenzialen in erregbaren Zellen zugrunde liegen. Durch die Beeinflussung der Spike‑Schwelle, der Feuerfrequenz und der Erholung von der Inaktivierung wirkt Na+ CP Typ IIIα auf die Erregbarkeit neuronaler Netzwerke sowie auf aktivitätsabhängige Signalprogramme, die mit der synaptischen Transmission verknüpft sind. Die Aktivität von SCN3A überschneidet sich mit Signalwegen der Membranerregbarkeit, die Ionenfluss mit calciumabhängiger Transkription, axonaler Erregungsleitung und neuroentwicklungsbezogener Musterbildung koppeln. Genetische und funktionelle Störungen von SCN3A wurden mit veränderten Erregbarkeitsphänotypen in Verbindung gebracht und werden im Kontext epilepsierelevanter Mechanismen, neuroentwicklungsbezogener Störungen und Schaltkreis‑Dysfunktionen untersucht.

Das Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scn3a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scn3a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scn3a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Na+ CP type IIIα-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scn3a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Na+ CP type IIIα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Scn3a-Exone abzielen, die für die Na+ CP type IIIα-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scn3a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scn3a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Na+ CP type IIIα HDR-Plasmid (m) und Na+ CP type IIIα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scn3a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scn3a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.