Na⁺ CP type IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406612

Übersicht

SCN3A kodiert den menschlichen spannungsabhängigen Natriumkanal Na⁺ CP Typ IIIα, eine porenbildende α‑Untereinheit, die den schnellen, kurzzeitigen Na⁺‑Einstrom ermöglicht, der für die Auslösung und Weiterleitung von Aktionspotenzialen in erregbaren Zellen erforderlich ist. Das Gating des Kanals und seine Lokalisation in der Membran sind in Netzwerke der neuronalen Erregbarkeit eingebunden, einschließlich der Regulation von Depolarisationsschwellen, der Entladungsfrequenz und der aktivitätsabhängigen Signalübertragung. Die SCN3A‑Funktion ist mit übergeordneten Signalwegen der Ionenhomöostase und synaptischen Transmission verknüpft, wobei veränderte Natriumströme die Entwicklung neuronaler Schaltkreise und deren Erregbarkeit stören können. Eine genetische und funktionelle Fehlregulation von SCN3A wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und anfallsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was SCN3A für mechanistische Studien zu Kanalopathien und elektrophysiologischen Funktionsstörungen relevant macht.

Das Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SCN3A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SCN3A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SCN3A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Na+ CP type IIIα-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SCN3A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Na+ CP type IIIα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SCN3A-Exone abzielen, die für die Na+ CP type IIIα-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SCN3A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SCN3A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Na+ CP type IIIα HDR-Plasmid (h) und Na+ CP type IIIα HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SCN3A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SCN3A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.