Plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type Iα (m): sc-422818
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Na+ CP type Iα Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Na+ CP type Iα, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type Iα (m) | sc-422818 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Scn1a code la sous-unité α du canal sodique voltage‑dépendant Na+ CP de type Iα, un déterminant majeur de l’initiation et de la propagation des potentiels d’action dans les neurones. En contrôlant les courants sodiques rapides entrants au segment initial de l’axone et aux nœuds de Ranvier, il module les seuils de décharge neuronale, la précision temporelle des spikes et la synchronisation des réseaux. La fonction de Scn1a s’articule avec l’équilibre excitation–inhibition, la signalisation dépendante de l’activité et les voies d’homéostasie ionique qui influencent la transmission synaptique et la stabilité des circuits. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de SCN1A sont fortement associées à une susceptibilité aux crises et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un locus clé pour des études mécanistiques dans des modèles murins.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type Iα (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scn1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scn1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scn1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Na+ CP type Iα.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scn1a pour l'étude de la signalisation de Na+ CP type Iα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Scn1a essentiels à la fonction de Na+ CP type Iα
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scn1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Na+ CP type Iα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Na+ CP type Iα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scn1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Na+ CP type Iα plasmide HDR (m) et le Na+ CP type Iα (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scn1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scn1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.