Plasmide CRISPR/Cas9 KO NALP1A (m): sc-431476

Présentation

Le gène murin **Nlrp1a** code **NALP1A**, un récepteur cytosolique de type NOD (NLR) qui agit comme capteur d’inflammasome, reliant la détection du stress cellulaire à la signalisation de l’immunité innée. Lors de son activation, NALP1A favorise l’assemblage de complexes inflammasomes qui déclenchent l’activation de la caspase‑1 et, en aval, la maturation de cytokines pro‑inflammatoires telles que l’IL‑1β et l’IL‑18, couplant la détection du danger aux programmes de mort cellulaire pyroptotique. Cette voie s’articule avec l’amorçage via NF‑κB, les réponses au stress mitochondrial et, plus largement, les réseaux de récepteurs de reconnaissance des motifs qui régulent l’inflammation tissulaire. Une signalisation de l’inflammasome dérégulée est impliquée dans des phénotypes inflammatoires et auto‑immuns et fait l’objet de nombreuses études dans le contexte des interactions hôte–pathogène comme des déclencheurs inflammatoires stériles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NALP1A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nlrp1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nlrp1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nlrp1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NALP1A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nlrp1a pour l'étude de la signalisation de NALP1A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nlrp1a essentiels à la fonction de NALP1A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nlrp1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NALP1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NALP1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nlrp1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NALP1A plasmide HDR (m) et le NALP1A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nlrp1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nlrp1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.