Plasmide Double Nickase (m) NaDC-1: sc-422975-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) NaDC-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NaDC-1 Double Nickase (m) et le plasmide NaDC-1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc13a2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) NaDC-1 | sc-422975-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc13a2 code le cotransporteur de dicarboxylates dépendant du sodium NaDC-1, un transporteur de la membrane apicale qui couple le gradient de Na+ à la captation d’intermédiaires du cycle de Krebs tels que le citrate, le succinate et l’α-cétoglutarate. Dans le tubule proximal rénal de la souris, NaDC-1 contribue à la réabsorption du citrate et influence ainsi les taux de citrate urinaire, l’homéostasie acido-basique et la gestion des sels de calcium. En régulant la disponibilité intracellulaire des dicarboxylates, NaDC-1 peut affecter l’anaplérose mitochondriale et les flux du réseau métabolique liés au cycle de l’ATC. Des altérations de la fonction de Slc13a2/NaDC-1 ont été associées à des phénotypes pertinents pour la formation de calculs rénaux, à la physiologie du transport tubulaire rénal et à des adaptations métaboliques étudiées en néphrologie et dans des modèles de métabolisme systémique.
NaDC-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc13a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc13a2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc13a2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc13a2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.