N4BP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412585-ACT

N4BP2 (NEDD4-Bindungsprotein 2) ist ein großes intrazelluläres Protein, das aufgrund seiner beschriebenen Interaktion mit E3-Ligasen der NEDD4-Familie an ubiquitinabhängiger Signalübertragung beteiligt ist und damit mit der Regulation von Proteinumsatz und Signaltransduktion in Verbindung steht. Es wurde mit der Kontrolle der Zytoskelettorganisation und der Zellmotilität assoziiert, was zu Rollen in der Dynamik von Adhäsionen und im intrazellulären Transport passt. Expressions- und Muster genetischer Veränderungen von N4BP2 wurden in onkologischen sowie immunbezogenen Kontexten untersucht, was seine Relevanz für Signalwege unterstreicht, die Proliferation, Stressantworten und entzündliche Signalgebung prägen. Diese Eigenschaften machen N4BP2 zu einem nützlichen Ziel, um das Zusammenspiel von Ubiquitin-Signalwegen und nachgeschaltete transkriptionelle Programme in menschlichen Zellmodellen zu untersuchen.

N4BP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen N4BP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

N4BP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des N4BP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der N4BP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen N4BP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native N4BP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von N4BP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des N4BP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem N4BP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.