Plásmido CRISPR de Activación (h) N-SMase2: sc-401937-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) N-SMase2 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) N-SMase2 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR N-SMase2 (h) y el plásmido de activación CRISPR N-SMase2 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de SMPD3. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: N-SMase2 Anticuerpo (G-6): sc-166637
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) N-SMase2 | sc-401937-ACT | 20 µg | $397.00 |
El SMPD3 humano codifica la esfingomielinasa neutra 2 (N‑SMase2), una enzima asociada a membrana dependiente de Mg2+ que hidroliza la esfingomielina para generar ceramida y fosfocolina. A través de la producción de ceramida, la N‑SMase2 ayuda a coordinar la señalización de esfingolípidos vinculada a la remodelación de microdominios de membrana, el tráfico vesicular y vías de respuesta al estrés que influyen en la apoptosis, la senescencia y la señalización inflamatoria. La actividad de SMPD3 se interseca con redes de señalización metabólicas y dependientes de citocinas y contribuye a la regulación de la homeostasis de células neuronales, óseas y epiteliales. En la literatura, un desequilibrio en la balanza esfingomielina–ceramida que involucra a la N‑SMase2 se ha asociado con procesos neurodegenerativos, disfunción metabólica y fenotipos asociados a tumores, lo que convierte a SMPD3 en una diana útil para la genómica funcional enfocada en vías.
N-SMase2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMPD3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
N-SMase2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMPD3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMPD3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de N-SMase2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMPD3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de N-SMase2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía N-SMase2 en células tumorales con expresión de SMPD3 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.