Plásmido Doble Nickase (m) N-cadherin: sc-419593-NIC

El gen Cdh2 de ratón codifica la N-cadherina, un receptor de adhesión dependiente de calcio que media uniones homofílicas célula–célula y se conecta con el citoesqueleto de actina a través de complejos de cateninas. La N-cadherina coordina señalización dependiente del contacto que influye en programas tipo transición epitelio-mesénquima, la migración colectiva, el crecimiento de neuritas y la formación de sinapsis, y se integra con vías como Wnt/β-catenina, las GTPasas Rho y Hippo/YAP/TAZ, que regulan la polaridad y la mecanotransducción. En el desarrollo y la remodelación tisular, Cdh2 es esencial para la morfogénesis, el patrón cardíaco y neural, y el mantenimiento de la integridad de las uniones adherentes. La expresión o localización desregulada de la N-cadherina se usa con frecuencia como marcador de estados de adhesión alterados en modelos de fibrosis, trastornos del neurodesarrollo e invasión de células cancerosas, lo que respalda estudios mecanísticos de fenotipos dependientes de la adhesión.

N-cadherin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cdh2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cdh2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cdh2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cdh2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.