Myosin XVIIIB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410206-ACT

ヒトMYO18Bは、非典型的なアクチン関連モータータンパク質であるミオシンXVIIIBをコードしており、細胞骨格構築の組織化や、細胞接着・遊走・細胞内構造の維持といったアクチン依存的プロセスの協調に関与すると考えられています。MYO18Bは、アクチンネットワークや足場タンパク質複合体との相互作用を介して、メカノトランスダクションや細胞形態の維持に寄与し、細胞骨格ダイナミクスを組織構造を制御するより広範なシグナル伝達プログラムへと結び付けます。腫瘍生物学や筋関連表現型に関する研究では、MYO18B発現の変化や細胞骨格制御の破綻が報告されており、アクトミオシン構造の変化が浸潤能、収縮性、分化に影響し得ることが示唆されています。そのためMYO18Bは、細胞運動性、細胞骨格リモデリング、ならびにがんに関連する細胞挙動の変化を司る経路の文脈で、しばしば研究対象となっています。

Myosin XVIIIB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYO18Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Myosin XVIIIB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYO18B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYO18B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Myosin XVIIIBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYO18B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMyosin XVIIIB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYO18B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMyosin XVIIIB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。