Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myosin XVIIIB: sc-410206-ACT

Le gène humain **MYO18B** code la myosine XVIIIB, une protéine motrice non conventionnelle associée à l’actine, impliquée dans l’organisation de l’architecture du cytosquelette et la coordination de processus dépendants de l’actine tels que l’adhésion cellulaire, la migration et l’organisation intracellulaire. Par ses interactions avec les réseaux d’actine et des complexes d’échafaudage, **MYO18B** contribue à la mécanotransduction et au maintien de la morphologie cellulaire, en reliant la dynamique du cytosquelette à des programmes de signalisation plus larges qui régulent la structure tissulaire. Une expression altérée de **MYO18B** ou une perturbation de la régulation du cytosquelette a été rapportée dans des études sur la biologie tumorale et des phénotypes liés au muscle, où des modifications de l’organisation actomyosine peuvent influencer l’invasion, la contractilité et la différenciation. En conséquence, **MYO18B** est fréquemment étudié dans les voies contrôlant la motilité cellulaire, le remodelage du cytosquelette et les changements de comportement cellulaire associés au cancer.

Myosin XVIIIB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYO18B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myosin XVIIIB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYO18B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYO18B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myosin XVIIIB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYO18B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myosin XVIIIB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myosin XVIIIB dans les cellules tumorales présentant une expression de MYO18B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.