Plasmide Double Nickase (h) Myosin Vb: sc-403324-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Myosin Vb correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Myosin Vb Double Nickase (h) et le plasmide Myosin Vb Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MYO5B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Myosin Vb | sc-403324-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Myosin Vb | sc-403324-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MYO5B code la myosine Vb, une protéine motrice basée sur l’actine qui coordonne le trafic vésiculaire et l’acheminement polarisé vers la membrane grâce à des interactions avec les GTPases Rab et les cargos des endosomes de recyclage. La myosine Vb régule le recyclage apical, la polarité épithéliale et la transcytose, influençant ainsi l’organisation des jonctions serrées et la localisation des protéines membranaires dans des tissus tels que l’intestin, le foie et le rein. Une perturbation du trafic dépendant de MYO5B dérègle le tri endosomal et l’expression à la surface des transporteurs et des récepteurs, établissant un lien entre une fonction altérée de la myosine Vb et des défauts de barrière épithéliale et de gestion des nutriments. Ces processus situent MYO5B au cœur des voies de transport cytosquelettique et de recyclage membranaire, fréquemment étudiées dans les travaux sur la polarité cellulaire, la dynamique des endosomes et les mécanismes pathologiques associés au trafic intracellulaire.
Myosin Vb Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MYO5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MYO5B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MYO5B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MYO5B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.