Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Id (h): sc-403425

Présentation

MYO1D code la myosine Id, une myosine non conventionnelle basée sur l’actine, impliquée dans l’organisation du cytosquelette cortical et la régulation de la dynamique membranaire. Par ses interactions avec les filaments d’actine et des complexes associés à la membrane, MYO1D contribue à la polarité cellulaire, au trafic vésiculaire et à des processus liés à la motilité qui influencent l’architecture tissulaire. Une expression ou une fonction altérée de MYO1D a été associée à un remodelage cytosquelettique dérégulé et à des réseaux de signalisation liés à l’organisation épithéliale, à la migration et à la biologie tumorale dans plusieurs contextes. En tant qu’effecteur mécanochimique à la périphérie cellulaire, MYO1D est étudiée pour ses rôles dans le couplage de la dynamique de l’actine à la tension membranaire et au transport directionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Id (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYO1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYO1D, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYO1D à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin Id.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYO1D pour l'étude de la signalisation de Myosin Id, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYO1D essentiels à la fonction de Myosin Id
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYO1D pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin Id plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Myosin Id plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYO1D. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin Id plasmide HDR (h) et le Myosin Id (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYO1D pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYO1D définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.