Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myosin Id: sc-403425-ACT

Le gène humain **MYO1D** code la myosine Id, un moteur associé aux membranes et dépendant de l’actine, impliqué dans le couplage du cytosquelette cortical d’actine aux membranes intracellulaires. La myosine Id participe à des processus tels que le trafic membranaire, le recyclage endocytaire, ainsi que l’organisation de la polarité et de la morphologie cellulaires, en reliant le remodelage du cytosquelette au contrôle spatial de la signalisation à la membrane plasmique. Par ces fonctions, **MYO1D** peut influencer des voies qui dépendent d’un transport vésiculaire dirigé et d’une répartition des récepteurs dépendante du cytosquelette. La dérégulation des dynamiques actine–membrane et des programmes de polarité est pertinente pour des phénotypes associés à des maladies, notamment des altérations de la migration cellulaire et de l’organisation épithéliale, ce qui fait de **MYO1D** une cible utile pour des études mécanistiques de l’homéostasie cellulaire.

Myosin Id Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYO1D sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myosin Id Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYO1D dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYO1D, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myosin Id. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYO1D natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myosin Id au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myosin Id dans les cellules tumorales présentant une expression de MYO1D silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.