Plasmide CRISPR d'Activation (h) myomesin-2: sc-403165-ACT

MYOM2 code pour la myomésine-2, un composant structural majeur de la bande M du sarcomère, qui assure le pontage des filaments épais et stabilise l’architecture des myofibrilles dans le muscle strié. En organisant l’alignement des filaments de myosine et en contribuant à l’élasticité passive, la myomésine-2 favorise une transmission efficace de la force lors de la contraction et l’adaptation aux contraintes mécaniques. L’expression de MYOM2 et l’intégrité de la bande M sont coordonnées avec les programmes d’assemblage du sarcomère et les processus de mécanotransduction qui façonnent la fonction des cardiomyocytes et du muscle squelettique. Des altérations de l’échafaudage sarcomérique et une dysrégulation de MYOM2 ont été associées à des cardiomyopathies héréditaires et à des défauts myofibrillaires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes des maladies musculaires.

myomesin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYOM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

myomesin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYOM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYOM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de myomesin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYOM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de myomesin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie myomesin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYOM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.