Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
myoglobin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401370
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- myoglobin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico myoglobin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: myoglobin Anticuerpo (A-6): sc-393020
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
myoglobin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401370 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
MB codifica la mioglobina, una proteína de unión al oxígeno que contiene hemo y que facilita el almacenamiento y la difusión intracelular de oxígeno en el músculo estriado, apoyando el metabolismo aeróbico durante fluctuaciones en la demanda de oxígeno. Al amortiguar la disponibilidad de oxígeno, la mioglobina influye en la fosforilación oxidativa mitocondrial, la homeostasis redox y las respuestas a la hipoxia y a las especies reactivas de nitrógeno/oxígeno. La alteración de la expresión o la función de MB se ha estudiado en el contexto de miopatías, lesiones musculares relacionadas con isquemia y una adaptación metabólica más amplia de las células musculares. En oncología y biología cardiovascular, el manejo del oxígeno asociado a la mioglobina y las vías de estrés oxidativo suelen investigarse como determinantes de la aptitud celular bajo condiciones de oxígeno limitado.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO myoglobin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína myoglobin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MB para la investigación de la señalización de myoglobin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MB críticos para la función de myoglobin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MB para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido myoglobin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido myoglobin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR myoglobin (h) y el plásmido HDR myoglobin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.