Plasmide CRISPR d'Activation (h) myocilin: sc-401843-ACT

Le gène humain **MYOC** code la myociline, une glycoprotéine extracellulaire sécrétée, enrichie dans les tissus oculaires, qui contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire, à l’adhésion cellulaire et à la modulation de la dynamique du cytosquelette. La myociline est associée aux processus de contrôle qualité du réticulum endoplasmique et peut, lorsqu’elle est mal repliée, influencer la protéostasie et la signalisation du stress, en affectant la sécrétion et le remodelage de la matrice. Des altérations de l’expression de **MYOC** ou de la prise en charge de la protéine ont été liées à une dérégulation de l’écoulement de l’humeur aqueuse et à un dysfonctionnement du trabéculum, ce qui la rend pertinente pour les études de l’homéostasie de la pression intraoculaire. Ces fonctions placent **MYOC** à l’interface des voies de la matrice extracellulaire, du trafic vésiculaire et des réponses cellulaires au stress, mobilisées pour explorer la biologie cellulaire oculaire.

myocilin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYOC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

myocilin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYOC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYOC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de myocilin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYOC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de myocilin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie myocilin dans les cellules tumorales présentant une expression de MYOC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.