Plasmide CRISPR d'Activation (m) Myocardin: sc-431931-ACT

Myocd code pour la myocardine, un puissant coactivateur transcriptionnel qui s’associe au facteur de réponse au sérum (SRF) afin de réguler des programmes géniques dépendants des boîtes CArG, contrôlant la différenciation des muscles lisses et cardiaques. La myocardine intègre des signaux issus de la dynamique RhoA/actine et de voies associées aux MAPK pour coordonner l’assemblage de l’appareil contractile, l’organisation du cytosquelette et la modulation phénotypique des cellules musculaires lisses vasculaires. Une activité altérée de MYOCD est liée à un remodelage vasculaire dérégulé et à une expression anormale des gènes musculaires cardiaques, ce qui en fait un nœud d’étude pertinent pour les mécanismes impliqués dans des modèles d’hypertension, d’athérosclérose et de cardiomyopathie. Dans les systèmes murins, la perturbation de Myocd constitue un moyen aisément exploitable pour interroger le contrôle transcriptionnel de la spécification et de la maturation des lignages musculaires.

Myocardin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Myocd sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myocardin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Myocd dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Myocd, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myocardin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Myocd natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myocardin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myocardin dans les cellules tumorales présentant une expression de Myocd silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.