Plasmide CRISPR/Cas9 KO MYL9 (h): sc-401577

Présentation

MYL9 code la chaîne légère 9 de la myosine, une chaîne légère régulatrice qui module la contractilité actine–myosine en contrôlant l’activité du moteur de la myosine II. Son état de phosphorylation intègre des signaux transmis par la kinase des chaînes légères de la myosine dépendante de Ca²⁺/calmoduline et par les voies RhoA–ROCK afin de réguler la formation des fibres de stress, la dynamique des adhésions focales et les changements de forme cellulaire. MYL9 contribue à la contraction du muscle lisse ainsi qu’à des processus non musculaires, notamment la cytocinèse, la migration cellulaire et les réponses contractiles des cellules endothéliales ou des fibroblastes. Une contractilité liée à MYL9 dérégulée et un remodelage du cytosquelette ont été associés à une altération du tonus vasculaire, à la fibrose tissulaire et à des comportements cellulaires invasifs pertinents pour la biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MYL9 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYL9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYL9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYL9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MYL9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYL9 pour l'étude de la signalisation de MYL9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYL9 essentiels à la fonction de MYL9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYL9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MYL9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MYL9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYL9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MYL9 plasmide HDR (h) et le MYL9 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYL9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYL9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.