Particules Lentivirales d'Activation (m) MYH9: sc-421784-LAC

Myh9 code la myosine IIA non musculaire (MYH9), une protéine motrice dépendante de l’actine qui génère une force contractile et contribue à l’organisation du cytosquelette dans les cellules de souris. MYH9 régule la dynamique d’adhérence, la polarité cellulaire et la migration en coordonnant le remodelage actomyosine, la formation des fibres de stress et la mécanotransduction, avec des effets en aval sur des processus tels que la cytocinèse et l’intégrité de la barrière épithéliale. Par ses interactions avec la signalisation RhoA/ROCK, les composants des adhésions focales et la machinerie du trafic membranaire, MYH9 aide à coupler les signaux mécaniques à des modifications de la forme cellulaire et des programmes d’expression génique. Une activité altérée de MYH9 a été associée à des anomalies de la biologie hématopoïétique et rénale, et fait l’objet de nombreuses études dans des contextes impliquant la thrombocytopénie, la dysfonction glomérulaire et des phénotypes développementaux liés au cytosquelette.

Les particules d'activation lentivirales MYH9 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Myh9 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MYH9 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Myh9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MYH9. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Myh9 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.