Plasmide CRISPR d'Activation (m) MYH9: sc-421784-ACT

Myh9 code la chaîne lourde de myosine II A non musculaire (MYH9), un moteur essentiel basé sur l’actine qui génère une force contractile et soutient la tension corticale, la dynamique d’adhérence et la cytokinèse. L’activité de MYH9 s’intègre aux voies de signalisation RhoA/ROCK, au remodelage des fibres de stress d’actine et au renouvellement des adhérences focales pour réguler la polarité cellulaire, la migration et la mécanotransduction. Dans les tissus murins, Myh9 contribue au fonctionnement des cellules hématopoïétiques et immunitaires, à l’intégrité épithéliale et à la morphogenèse du développement, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour étudier le contrôle cytosquelettique de l’architecture tissulaire. Une contractilité dépendante de MYH9 dérégulée est associée à des défauts de division cellulaire et de fonction barrière, et est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation, de fibrose et d’invasion associée au cancer.

MYH9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Myh9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYH9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Myh9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Myh9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYH9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Myh9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYH9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYH9 dans les cellules tumorales présentant une expression de Myh9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.