MYH9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401182-ACT

MYH9 は、非筋ミオシンIIAをコードしており、これはアクチン依存性のモータータンパク質として ATP 加水分解を機械的な力へと変換し、細胞骨格の組織化、細胞接着、極性、収縮性の制御に関与します。アクトミオシン動態における役割を通じて、MYH9 は細胞遊走、細胞質分裂、メカノトランスダクションなどの過程に影響を及ぼし、Rho GTPase シグナル伝達やフォーカルアドヒージョンのリモデリングを協調的に制御する経路と統合されます。MYH9 の機能異常は、巨大血小板性血小板減少症や血小板機能障害を特徴とする MYH9 関連疾患と関連しており、上皮の恒常性や浸潤性細胞挙動といった文脈でも研究されています。これらの生物学的関連性により、MYH9 は細胞骨格による細胞構築の制御や、ストレス応答性シグナル伝達を解明するための有用な標的となっています。

MYH9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYH9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYH9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYH9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYH9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYH9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYH9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYH9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYH9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYH9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。