Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYH9: sc-401182-ACT

MYH9 code la myosine IIA non musculaire, une protéine motrice dépendante de l’actine qui convertit l’hydrolyse de l’ATP en force mécanique afin de réguler l’organisation du cytosquelette, l’adhérence cellulaire, la polarité et la contractilité. Par ses rôles dans la dynamique actomyosine, MYH9 influence des processus tels que la migration cellulaire, la cytocinèse et la mécanotransduction, en s’intégrant à des voies qui coordonnent la signalisation des GTPases Rho et le remodelage des adhésions focales. Une altération de la fonction de MYH9 est associée aux troubles liés à MYH9, caractérisés par une macrothrombocytopénie et un dysfonctionnement plaquettaire, et ce gène a également été étudié dans des contextes d’intégrité épithéliale et de comportement cellulaire invasif. Ces liens biologiques font de MYH9 une cible utile pour analyser le contrôle cytosquelettique de l’architecture cellulaire et de la signalisation sensible au stress.

MYH9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYH9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYH9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYH9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYH9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYH9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYH9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYH9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYH9 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYH9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.