Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYH8: sc-400346-ACT

MYH8 code la chaîne lourde de myosine 8, une protéine motrice sarcomérique qui assure la contractilité dépendante de l’actine et contribue à la formation des filaments épais dans le muscle strié. En tant que composant du complexe de myosine II, MYH8 participe à la génération de force dépendante de l’ATP et influence l’organisation des myofibrilles, la maturation des fibres musculaires et la dynamique du cytosquelette. L’expression de MYH8 est régulée au cours du développement et souvent enrichie dans des contextes spécifiques ou de développement du muscle squelettique, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la myogenèse et de la plasticité musculaire. Une régulation altérée ou des variants affectant la fonction motrice de la myosine ont été associés à des myopathies congénitales et à des phénotypes liés à l’arthrogrypose distale, reliant MYH8 aux mécanismes des maladies neuromusculaires.

MYH8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYH8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYH8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYH8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYH8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYH8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYH8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYH8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYH8 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYH8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.