Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYH7B: sc-400621-ACT

MYH7B code un membre de la famille des chaînes lourdes de myosine sarcomérique, impliqué dans l’activité motrice basée sur l’actine et dans l’organisation de l’appareil contractile au sein des lignées de muscle strié. En tant qu’élément de la génération de force dépendante de la myosine, MYH7B est fonctionnellement lié à la dynamique du cytosquelette, à la transduction mécanochimique dépendante de l’ATP et à des voies qui maintiennent l’intégrité des myofibrilles ainsi que la différenciation des cellules musculaires. La dérégulation des programmes géniques des chaînes lourdes de myosine est fréquemment étudiée dans le contexte du remodelage des cardiomyocytes et du muscle squelettique, où des modifications de l’expression des gènes contractiles contribuent à des phénotypes pathologiques. MYH7B constitue donc une cible utile pour étudier le contrôle transcriptionnel des composants du sarcomère, les réseaux de gènes spécifiques du muscle et les processus de remodelage sensibles au stress dans des modèles cellulaires humains.

MYH7B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYH7B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYH7B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYH7B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYH7B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYH7B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYH7B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYH7B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYH7B dans les cellules tumorales présentant une expression de MYH7B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.