Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYH7: sc-400383-ACT

MYH7 code la chaîne lourde de β-myosine, une protéine motrice sarcomérique essentielle qui forme les filaments épais dans le muscle strié et convertit l’hydrolyse de l’ATP en force mécanique. Son interaction régulée avec l’actine et les chaînes légères de la myosine soutient la contractilité, l’assemblage du sarcomère et les programmes de mécanotransduction qui relient la charge de travail à l’adaptation transcriptionnelle et métabolique. L’expression de MYH7 et l’équilibre de ses isoformes sont étroitement liés à la physiologie du cœur et des muscles squelettiques à fibres lentes, en s’intégrant aux voies de gestion du calcium, de signalisation hypertrophique et de remodelage du cytosquelette. Les variations génétiques ou la dérégulation de MYH7 sont fortement associées aux cardiomyopathies héréditaires et à des phénotypes de dysfonction contractile largement modélisés dans des systèmes cellulaires humains.

MYH7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYH7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYH7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYH7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYH7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYH7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYH7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYH7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYH7 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYH7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.