MYH6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400351-ACT

MYH6 codifica a cadeia pesada alfa de miosina cardíaca, um componente central do filamento espesso de miosina II que impulsiona o encurtamento do sarcômero por meio do ciclo de pontes cruzadas actina–miosina dependente de ATP. No miocárdio humano, o MYH6 contribui para a cinética contrátil, a geração de força e o acoplamento excitação–contração coordenado por meio de interações com proteínas sarcoméricas regulatórias e estruturais. A expressão de MYH6 e o equilíbrio de suas isoformas são rigidamente regulados durante o desenvolvimento e em resposta ao estresse hemodinâmico, vinculando-o a vias que controlam a miofibrilogênese e o remodelamento cardíaco. Variações genéticas ou desregulação de MYH6 têm sido associadas a cardiomiopatias hereditárias e a fenótipos cardíacos congênitos, tornando-o um alvo frequente em estudos mecanísticos da função cardíaca.

MYH6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH6 em células tumorais com expressão de MYH6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.