Plásmido Doble Nickase (m) MYH10: sc-429543-NIC

Myh10 codifica la cadena pesada de miosina no muscular IIB (MYH10), un importante motor basado en actina que genera las fuerzas contráctiles necesarias para la citocinesis, la migración celular y el mantenimiento de la arquitectura tisular. Las dinámicas de actomiosina impulsadas por MYH10 regulan la adhesión y la polaridad celulares mediante el recambio de adhesiones focales y la remodelación del citoesqueleto dependiente de RhoA/ROCK, acoplando la tensión mecánica a salidas de señalización que moldean la morfogénesis. En sistemas murinos, la actividad de MYH10 está estrechamente ligada a programas del desarrollo y a la organización de tejidos neurales y cardiovasculares, y la desregulación de la función de la miosina II no muscular se ha asociado con defectos en la división celular, motilidad alterada e interacciones aberrantes con la matriz extracelular, relevantes para fenotipos asociados a enfermedad. Estas propiedades convierten a Myh10 en un nodo útil para analizar la mecanotransducción, la organización del citoesqueleto y la regulación de la expresión génica dependiente de la fuerza.

MYH10 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Myh10 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Myh10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Myh10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Myh10 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.