Plásmido CRISPR de Activación (h) Myf-6: sc-401899-ACT

MYF6 codifica Myf-6 (también conocido como MRF4), un factor de transcripción de tipo hélice–bucle–hélice básico que funciona dentro de la red de factores reguladores miogénicos que controla el compromiso del linaje del músculo esquelético y la diferenciación terminal. Myf-6 coordina programas transcripcionales vinculados al ensamblaje miofibrilar, la maduración de las fibras musculares y el mantenimiento de la identidad muscular mediante interacciones con elementos reguladores E-box y una comunicación cooperativa con otros factores miogénicos. Su actividad se integra con vías que regulan la miogénesis y la remodelación muscular, incluido el circuito transcripcional aguas abajo de señales del desarrollo y la regulación epigenética de la expresión génica específica del músculo. La desregulación del control transcripcional miogénico que involucra a MYF6 es relevante para estudios del desarrollo neuromuscular, la dinámica de degeneración/regeneración muscular y contextos tumorales que muestran programas aberrantes de diferenciación miogénica, como el rabdomiosarcoma.

Myf-6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYF6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Myf-6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYF6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYF6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Myf-6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYF6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Myf-6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Myf-6 en células tumorales con expresión de MYF6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.