Plasmide Double Nickase (h) Myf-5: sc-400449-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Myf-5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Myf-5 Double Nickase (h) et le plasmide Myf-5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MYF5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Myf-5 Antibody (B-2): sc-518039
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Myf-5 | sc-400449-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Myf-5 | sc-400449-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MYF5 code le facteur de transcription à domaine basique hélice–boucle–hélice (bHLH) Myf-5, un facteur régulateur myogénique précoce qui contribue à spécifier la lignée du muscle squelettique et à initier la détermination des myoblastes. Myf-5 agit via la liaison à l’ADN sur des motifs E-box et par un contrôle transcriptionnel coopératif avec d’autres MRF et cofacteurs afin de réguler des gènes impliqués dans la myogenèse, la sortie du cycle cellulaire et la différenciation. Son activité s’articule avec des voies de signalisation du développement telles que WNT, SHH et NOTCH, qui orientent les décisions de destinée des progéniteurs musculaires. Une dérégulation de l’expression de MYF5 ou des programmes myogéniques est pertinente pour l’étude des myopathies congénitales, de l’atrophie musculaire et de la régénération, ainsi que dans des contextes tumoraux où des marqueurs de lignée myogénique sont exprimés de manière aberrante.
Myf-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MYF5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MYF5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MYF5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MYF5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.