Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myf-5 (h): sc-400449

Présentation

MYF5 code le facteur régulateur myogénique humain Myf-5, un facteur de transcription basique à domaine hélice-boucle-hélice (bHLH) qui intervient précocement dans la détermination de la lignée musculaire squelettique et l’engagement des myoblastes. Myf-5 régule des programmes d’expression génique qui pilotent la différenciation myogénique par hétérodimérisation avec les protéines E et liaison à des motifs E-box dans des éléments régulateurs spécifiques du muscle. Il agit au sein de réseaux développementaux coordonnant la myogenèse, notamment via une régulation croisée avec d’autres membres de la famille des MRF tels que MYOD1 et MYOG, influençant les décisions de destinée cellulaire et le calendrier de différenciation. La dérégulation du contrôle transcriptionnel associé à MYF5 est pertinente pour l’étude des myopathies congénitales, des défauts de régénération musculaire et de contextes tumoraux présentant une expression aberrante de facteurs myogéniques ou un blocage de la différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myf-5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYF5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYF5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYF5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myf-5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYF5 pour l'étude de la signalisation de Myf-5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYF5 essentiels à la fonction de Myf-5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYF5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myf-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Myf-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYF5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myf-5 plasmide HDR (h) et le Myf-5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYF5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYF5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.