Plasmide CRISPR d'Activation (h) MuSK: sc-402534-ACT

MUSK code la kinase spécifique du muscle (MuSK), une tyrosine kinase réceptrice essentielle au développement et au maintien de la jonction neuromusculaire (JNM). Après stimulation par le couple agrine–LRP4, la signalisation de MuSK orchestre l’agrégation des récepteurs de l’acétylcholine (RACh) et la différenciation postsynaptique via des voies en aval incluant l’assemblage de complexes d’échafaudage associés à Dok7 et à la rapsyne, ainsi que le remodelage du cytosquelette. Ce programme favorise la stabilisation synaptique, l’innervation des fibres musculaires et la plasticité synaptique dépendante de l’activité. Une dérégulation de la signalisation de MuSK et l’instabilité de la JNM sont impliquées dans des troubles neuromusculaires, notamment les syndromes myasthéniques congénitaux et certains sous-types de myasthénie auto-immune.

MuSK Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUSK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MuSK Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUSK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUSK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MuSK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUSK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MuSK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MuSK dans les cellules tumorales présentant une expression de MUSK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.