Plasmide Double Nickase (h) MUS81: sc-402664-NIC

MUS81 code une endonucléase spécifique de structure qui forme un hétérodimère avec EME1/EME2 afin de résoudre les fourches de réplication bloquées et les intermédiaires de recombinaison, tels que des structures de type jonction de Holliday. Elle intervient dans les voies de réponse aux dommages de l’ADN et de stress réplicatif, en coordination avec la recombinaison homologue et la signalisation des points de contrôle, pour préserver la stabilité du génome. L’activité de MUS81 contribue à la fidélité de la ségrégation chromosomique et limite l’accumulation d’intermédiaires d’ADN toxiques pendant la phase S. Une dérégulation du traitement dépendant de MUS81 a été associée à une augmentation de l’instabilité génomique et à une sensibilité modifiée au stress réplicatif dans des contextes liés au cancer, ce qui en fait une cible fréquente des études mécanistiques sur la réparation de l’ADN.

MUS81 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MUS81 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MUS81. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MUS81. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MUS81.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.