Plasmide CRISPR d'Activation (h) MUS81: sc-402664-ACT

Le gène humain **MUS81** code une endonucléase spécifique de la structure, qui s’associe à **EME1/EME2** pour résoudre les fourches de réplication bloquées et les intermédiaires de recombinaison, notamment les jonctions de Holliday incisées, les D-loops et les flaps 3′. MUS81 intervient dans les réseaux de réponse aux dommages de l’ADN et maintient la stabilité du génome grâce à une action coordonnée avec la recombinaison homologue, les mécanismes de réparation associés à l’anémie de Fanconi et les voies de tolérance au stress réplicatif. En contrôlant le traitement de structures d’ADN aberrantes, MUS81 influence la signalisation des points de contrôle et la fidélité de la ségrégation chromosomique pendant la phase S et la mitose. Une dérégulation de l’activité de MUS81 ou de l’équilibre entre les voies a été associée à une altération de la gestion du stress réplicatif et à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et certaines déficiences héréditaires de réparation de l’ADN.

MUS81 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUS81 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MUS81 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUS81 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUS81, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MUS81. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUS81 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MUS81 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MUS81 dans les cellules tumorales présentant une expression de MUS81 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.