Plasmide Double Nickase (m) MuRF1: sc-436648-NIC

Le gène murin Trim63 code MuRF1, une ligase E3 de l’ubiquitine à doigt RING spécifique du muscle, qui régule la protéostasie en ciblant des protéines myofibrillaires et sarcomériques pour une dégradation dépendante de l’ubiquitine. MuRF1 agit au sein du système ubiquitine–protéasome et s’articule avec des voies qui contrôlent le remodelage musculaire, le dialogue autophagie–protéasome et une signalisation sensible au stress, laquelle façonne la taille des fibres et la composition contractile. Une activité de Trim63/MuRF1 altérée est fréquemment étudiée dans les contextes d’atrophie des muscles squelettique et cardiaque, de réponses à la désutilisation ou à la dénervation, du dépérissement associé à la cachexie et du remodelage lié aux cardiomyopathies. En tant que régulateur nodal du catabolisme musculaire, MuRF1 constitue un point d’entrée génétiquement manipulable pour disséquer les programmes transcriptionnels et post-traductionnels qui gouvernent le maintien de la masse musculaire.

MuRF1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Trim63 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Trim63. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Trim63. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Trim63.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.