Plasmide CRISPR d'Activation (h) MuRF1: sc-400797-ACT

TRIM63 code MuRF1, une ligase E3 ubiquitine de type RING-finger специфique du muscle, qui favorise le renouvellement sélectif, par le protéasome, de protéines sarcomériques et myofibrillaires lors du remodelage des muscles squelettique et cardiaque. MuRF1 coordonne l’activité du système ubiquitine–protéasome avec des voies de signalisation sensibles au stress, notamment des programmes transcriptionnels dépendants de FOXO et des voies cataboliques qui régulent l’homéostasie protéique et la fonction contractile. Une expression altérée de TRIM63/MuRF1 est associée à des phénotypes d’atrophie musculaire ainsi qu’à des processus de remodelage observés dans des contextes de maladie chronique et de désuétude, et elle est fréquemment étudiée comme effecteur moléculaire d’un déséquilibre de la protéostase. En tant que régulateur de la stabilité des myofibrilles, MuRF1 offre un levier mécanistique pour explorer les voies reliant le stress métabolique, l’inflammation et l’adaptation structurelle du muscle.

MuRF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRIM63 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MuRF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRIM63 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRIM63, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MuRF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRIM63 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MuRF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MuRF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRIM63 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.