Multimerin-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404741-ACT

MMRN1 kodiert Multimerin‑1, ein großes, über Disulfidbrücken verknüpftes, multimeres Glykoprotein, das in den α‑Granula von Thrombozyten sowie in Weibel‑Palade‑Körperchen von Endothelzellen gespeichert und bei zellulärer Aktivierung freigesetzt wird. Multimerin‑1 lokalisiert in die extrazelluläre Matrix und an die Thrombozytenoberfläche, wo es die Thrombozytenadhäsion und die Stabilisierung hämostatischer Antworten durch Interaktionen mit gerinnungs- und matrixassoziierten Partnern unterstützt. Diese Biologie verknüpft MMRN1 mit Signalwegen, die die Degranulation von Thrombozyten, die vaskuläre Homöostase und die Thrombusbildung unter Scherkräften steuern. Veränderte MMRN1‑Expression oder -Verteilung wurde bei Blutungs- und Thrombosephänotypen untersucht sowie als Marker für Thrombozyten‑/Endothelaktivierung in Kontexten entzündlicher und vaskulärer Erkrankungen.

Multimerin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MMRN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Multimerin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MMRN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MMRN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Multimerin-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MMRN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Multimerin-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Multimerin-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MMRN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.