Plasmide Double Nickase (h) mucolipin 2: sc-415216-NIC

MCOLN2 code la mucolipine 2 (TRPML2), un canal cationique endolysosomal qui régule l’homéostasie ionique des vésicules et le trafic membranaire. L’activité de TRPML2 contribue à la maturation endosome–lysosome, au flux autophagique et au fonctionnement des phagosomes en ajustant la composition ionique luminale et en facilitant la fusion ainsi que le traitement du cargo. Elle est particulièrement pertinente pour la signalisation de l’immunité innée et les réponses inflammatoires dans des contextes myéloïdes et épithéliaux, où la dynamique endolysosomale façonne la prise en charge des antigènes et le renouvellement des récepteurs. La dérégulation des canaux de la famille TRPML a été associée à des phénotypes de stress lysosomal et à une altération de la fonction des cellules immunitaires, faisant de MCOLN2 une cible utile pour étudier des mécanismes centrés sur le lysosome dans des modèles pertinents pour les maladies.

mucolipin 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MCOLN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MCOLN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MCOLN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MCOLN2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.