Plasmide Double Nickase (m) mucolipin 1: sc-430117-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) mucolipin 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide mucolipin 1 Double Nickase (m) et le plasmide mucolipin 1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Mcoln1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) mucolipin 1 | sc-430117-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) mucolipin 1 | sc-430117-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mcoln1 code la mucolipine 1 (TRPML1), un canal cationique endolysosomal perméable au Ca2+ qui régule l’homéostasie ionique lysosomale, le trafic membranaire et la dynamique fusion–fission. En couplant la libération de Ca2+ luminal à des effecteurs en aval, TRPML1 soutient le flux de la voie autophagie–lysosome, le traitement du contenu endocyté et l’exocytose lysosomale, importants pour l’élimination cellulaire et la détection des nutriments. La signalisation dépendante de Mcoln1 s’entrecroise avec les réponses au stress lysosomal et les programmes de transport vésiculaire qui influencent le contrôle qualité mitochondrial et la signalisation inflammatoire. Une altération de la fonction de TRPML1 est associée à des pathologies de surcharge lysosomale et à des phénotypes neurodégénératifs, faisant de Mcoln1 une cible clé pour des études mécanistiques du dysfonctionnement endolysosomal dans des modèles murins.
mucolipin 1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mcoln1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mcoln1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mcoln1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mcoln1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.