Plasmide Double Nickase (h) mucolipin 1: sc-403931-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) mucolipin 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide mucolipin 1 Double Nickase (h) et le plasmide mucolipin 1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MCOLN1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: mucolipin 1 Antibody (F-10): sc-398868
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) mucolipin 1 | sc-403931-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) mucolipin 1 | sc-403931-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCOLN1 code la mucolipine 1 (TRPML1), un canal cationique endolysosomal perméable au Ca²⁺ qui régule le trafic membranaire, la reformation des lysosomes et le flux autophagie–lysosome. La libération de Ca²⁺ médiée par TRPML1 coordonne les événements de fusion/fission vésiculaires et influence l’homéostasie ionique lysosomale, avec des répercussions sur la détection des nutriments et les voies d’adaptation au stress, notamment la signalisation mTORC1. Une perturbation de MCOLN1 altère le traitement des cargaisons endocytées et les mécanismes d’élimination cellulaire, reliant ainsi une fonction lysosomale modifiée à la neurodégénérescence et, plus largement, à la biologie des maladies de surcharge lysosomale. En tant que régulateur nodal du contrôle qualité des organites, MCOLN1 est fréquemment étudié dans des modèles de défauts de trafic intracellulaire, de réponses au stress oxydatif et de signalisation de l’immunité innée.
mucolipin 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MCOLN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MCOLN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MCOLN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MCOLN1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.