Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mucin 6/MUC6: sc-402946-ACT

MUC6 code la mucine 6, une mucine sécrétée de haut poids moléculaire, fortement O‑glycosylée, qui contribue à la barrière mucositaire viscoélastique à la surface des épithéliums, en particulier dans le tractus gastro-intestinal. En formant des matrices muqueuses de type gel et en interagissant avec d’autres mucines et des facteurs « trefoil », MUC6 favorise la protection de l’épithélium, la lubrification et la défense innée contre les agressions chimiques et microbiennes. Son expression est régulée au cours de la différenciation épithéliale et du remodelage inflammatoire, reliant la biologie de MUC6 à l’homéostasie des muqueuses et aux programmes de signalisation associés à la barrière. Les modifications des profils d’expression des mucines, notamment la dérégulation de MUC6, sont fréquemment étudiées dans le contexte de la métaplasie, de l’inflammation chronique et de la transformation épithéliale dans l’estomac et d’autres tissus muqueux.

Mucin 6/MUC6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUC6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mucin 6/MUC6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUC6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUC6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mucin 6/MUC6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUC6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mucin 6/MUC6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mucin 6/MUC6 dans les cellules tumorales présentant une expression de MUC6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.